Der Chelatbildner Nitrilotriessigsäure (NTA) wird häufig verwendet um rekombinante Proteine aufzureinigen. Die Komplexierung von NTA mit zweiwertigen Metallionen (Ni2+, Cu2+, etc.) erhöht die Affinität zu Polyhistidin-markierten (z. B. His6-Tag) Molekülen und ermöglicht somit eine nichtkovalente Bindung and das Protein-Tag.
Diese Eigenschaft kann darüber hinaus genutzt werden, um DNA-Protein-Konjugate auszubilden. NTA oder Tris-NTA werden zu diesem Zweck über ein Azid an das DBCO-modifizierte 5‘- oder 3‘-Ende eines Oligos geklickt. Tris-NTA ermöglicht hier eine besonders stabile nichtkovalente Bindung an His6-Tags.
Neben Spezifizität und Stabilität zeichnet sich die Bindung zwischen NTA und His6-Tags durch ihre Reversibilität aus. Die Bindung lässt sich, durch die Zugabe von konkurrierenden Chelatbildnern (z.B. Imidazol, EDTA), leicht unter milden Bedingungen lösen.
Die Tris-NTA Modifikation lässt zudem die eindeutige stöchiometrische Markierung von His6-getaggten Proteinen zu.
Literatur:
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